Autores:
- Ana Elisabete Pires, Carla Borges, Paula Castelhano, Fernanda Simões, Fernando Cardoso, José Matos- Ordem dos Biólogos
- ana.elisabete.pires@gmail.com
La parte inferior de cada pocillo se cubre con una fracción proteica – el antígeno y se fija a la parte inferior de cada pocillo de la placa ELISA.
A continuación, sigue un paso de incubación con el suero de los animales (que tienen menos o más anticuerpos contra el antígeno desarrollado después de la vacunación o la ausencia de anticuerpos si el perro no ha sido vacunado). Si el anticuerpo está presente en el suero de los animales que se une específicamente al antígeno y las dos proteínas (anticuerpo y antígeno) están unidas por enlaces débiles de tipo no covalente (ej. interacciones electrostáticas, enlaces de hidrógeno, fuerzas de Van der Waals y las interacciones hidrófoba).
A continuación, sigue un paso de incubación con un anticuerpo secundario que reconoce el anticuerpo para el antígeno, si está presente. Esto también se llama conjugado de anticuerpo secundario porque se ha asociado con él una enzima importante para el siguiente paso.
La incubación con sustrato: este paso si todas las conexiones se han establecido correctamente de modo que la enzima es capaz de escindir el sustrato y en este caso aparece un color amarillo al final de la incubación. Si no han establecido conexiones, es decir, si el anticuerpo no se encuentra en los enlaces de suero no están establecidos, y los componentes se separan en múltiples etapas de lavado en el protocolo previsto.
La aparición de color amarillo en el final de la prueba y su intensidad es directamente proporcional a la presencia y cantidad del anticuerpo en el suero. Es un método semi-cuantitativo.
¿Qué se pretende demostrar?
Este kit facilita la transmisión de conceptos de aprendizaje y de Inmunología, haciendola experimental y significativa. Con ImunoGénius lo queremos mostrar que la vacunación estimula el sistema inmune para producir anticuerpos específicos contra diferentes antígenos y por una prueba de ELISA es posible hacer una evaluación semi-cuantitativa de la situación de la inmunocompetencia de tres animales (vídeo em http://moodle.ordembiologos.pt/course/view.php?id=15)
Dirigido a:
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Primaria
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Secundaria
Materiales necesarios:
El kit contiene todos los reactivos necesarios. Se requiere una estufa (37ºC).
Riesgos:
Totalmente seguro
Observaciones:
A modo de ejemplo se puede consultar las 405 fichas que figuran en la página web de “Ciencia en Acción” (http://www.cienciaenaccion.org).